انتقال ژن تروپینون رداکتاز 2 (trii) به گیاه تنباکو

چکیده اسکوپولامین و هیوسیامین از تروپان آلکالوئیدهای مهم دارویی هستند که بدلیل تاثیر آن ها بر سیستم عصبی در درمان تشنج، سیاه سرفه و برونشیت مزمن مورد استفاده قرار می گیرند. در فرایند تولید اسکوپولامین و هیوسیامین ماده پیش ساز، تروپینون در نتیجه اثر آنزیم ?tr به دو متابولیت ثانویه یاد شده تبدیل می گردد، در حالی که در اثر آنزیم رقیب ??tr به یک آلکالوئید غیرتروپانی بنام کالیستیژن تبدیل می شود. به منظور مطالعه میزان رقابت آنزیم های trii و ?tr با یکدیگر و میزان بیان دو متابولیت یاد شده، فاژمید pbluescript نوترکیب حاوی ژن ??tr از e.coli تراریخت سوش ?dh5 استخراج و به همراه پلاسمید 121pbi با استفاده از آنزیم های برشی bamhi و ? sac برای همسانه سازی در جهت آنتی سنس و با استفاده از آنزیم برشی ? xba برای همسانه سازی در جهت سنس برش داده شدند.بعد از خالص سازی ژن هدف با استفاده از آنزیم dna t4 لیگاز در جهت آنتی سنس برای خاموشی و در جهت سنس برای افزایش بیان ژن trii به داخل ناقل بیان pbi1121 معرفی گردید. ناقل نوترکیب pbi121 ابتدا برای تکثیر داخل e.coli سوش dh5? کلون شد و متعاقبا در آگروباکتریوم تومفاسینس سوش های lba4404 و gv3101 و آگروباکتریوم رایزوژنز سوش msv440 برای انتقال به گیاه کلون گردید. بعد از تایید پلاسمید نوترکیب با استفاده از هضم آنزیمی و pcr، از آگروباکتریوم تومفاشینس سوش lba4404 برای انتقال ژن trii به گیاه تنباکو استفاده شد. موفق آمیز بودن انتقال ژن به تنباکو با استفاده از pcr با آغازگر های اختصاصی مقاومت به کانامایسین و ژن trii تایید شد.